人人澡超碰碰97碰碰碰,久久人人爽人人爽人人片,国产精品日日做人人爱,国产97在线 | 日韩

熱門搜索: 兔抗重組蛋白A(SPA)抗體 兔抗狗IgG(H+L)(不交叉貓IgG) 兔抗OVA雞卵清蛋白多克隆抗體 胎兒纖維連接蛋白(FFN)質控樣品 山羊抗兔IgG(H+L) 人-免疫球蛋白輕鏈λ(λ-IgLC)線性高值原料 人-免疫球蛋白輕鏈K型(K-IgLC)線性高值原料 人工尿液(不含肌酐,無菌)pH7.2 犬促黃體生成素(LH)抗體(標記) 犬促黃體生成素(LH)抗體(包被) 瓊脂糖/Agarose 羥自由基清除能力測定試劑盒(分光法) 硼酸緩沖液(1mol/L,pH8.0) 凝-血酶原時間(PT)測定試劑盒(凍干型) 凝-血酶時間(TT)測定試劑盒(凍干型) 尿蛋白定量測試盒檢測原理

PRODUCT CLASSIFICATION

產品分類

技術文章/ Technical Articles

您的位置:首頁  /  技術文章  /  豬瘟抗體ELISA試劑盒的研制

豬瘟抗體ELISA試劑盒的研制

更新時間:2013-08-28      瀏覽次數:1551

                                                             

      豬瘟抗體研究將含有編碼豬瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因的表達質粒pETE2的重組菌轉入受體菌BL21(DE3) plysS中,經IPTG的誘導,SDS-PAGE凝膠電泳分析,在約40Kda處有一特異表達的蛋白帶與預計的E2蛋白的大小基本一致;Western-blot印跡表明,該蛋白帶能與CSFV陽性血清發生特異反應。

    對大量重組菌的誘導表達,以包涵體的形式表達了具有抗原性的E2蛋白,收集菌體,凍融,超聲波裂解,離心收集沉淀。再分別用1M NaCl,0.5%TritonX-100,2M尿素,3M尿素,4M尿素洗滌包涵體,SDS-PAGE電泳純化E2蛋白,測定E2蛋白濃度,即為制備的基因工程抗原。

     以純化的E2蛋白為抗原包被酶標板,通過對ELISA各反應條件的優化,確定了*反應條件:重組E2蛋白的*包被濃度為2μg/ml,zui適包被條件為4℃ 36h;*封閉液為1%BSA,封閉條件為37℃2h再加4℃12h;*血清稀釋液為0.05%Tween-20/1%BSA/2%E.coli裂解液/PBS,血清稀釋倍數為100倍,HRP-兔抗豬IgGzui適工作濃度為1:1100,*二抗稀釋液為4%PEG6000/10%NCS/PBS,二抗工作時間為20 min。 采用已確立的ELISA反應條件,檢測了150份CSFV陰性血清(經兔體中和試驗和間接免疫熒光證實),根據試驗結果,確定了間接ELISA方法陰陽血清的判定標準。板內、板間檢測血清的變異系數均小于10%,對200份陰性血清的檢測結果表明本方法的特異性達95%,用建立的ELISA方法與兔體中和試驗、間接免疫熒光以及IDEXX公司的試劑盒進行比較,充分說明建立的以重組E2蛋白為抗原檢測豬瘟病毒抗體間接ELISA方法敏感性,特異性都是很好的,達到國外同類方法的水平。在此基礎上將成熟的ELISA技術試劑盒化,本試劑盒可操作性強,不需要配制額外試劑,3小時左右即可出結果,在4℃條件下可保存半年以上。

    用組裝的試劑盒分別對新生仔豬母源抗體水平檢測,規模化豬場豬群免疫狀態的監測,發病豬場血清檢測,基因疫苗免疫仔豬抗體水平檢測,試驗結果說明了本試劑盒能夠準確客觀地反映實際情況,進一步證明了本試劑盒的研制是成功的。

微信掃一掃

郵箱:[email protected]

傳真:021-51870610

地址:上海市顧戴路2988號B幢7樓

Copyright © 2025 上海信帆生物科技有限公司版權所有   備案號:滬ICP備13019554號-1    技術支持:化工儀器網

TEL:13764793648

掃碼加微信