大鼠血管緊張素轉化酶 (ACE)ELISA試劑盒 |
產品中文: | 大鼠血管緊張素轉化酶 (ACE)ELISA試劑盒 |
產品英文: | Mouse ACE (Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit |
產品規格: | 48T/96T |
所需實驗儀器: | 酶標儀,洗板機,離心機 |
保存條件: | 2-8度 |
有效期: | 6個月 |
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試劑盒組成: | | | | | | |
試劑盒組成 | 48T | 96T | 保存 | |
說明書 | 1份 | 1份 | | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | | |
密封袋 | 1個 | 1個 | | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 | |
標準品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
濃縮洗滌液 | (20倍)20ml×1瓶 | (30倍)20ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
注:標準品用標準品稀釋液依次做倍比稀釋 |
標本要求: | | | | | | |
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃備用,有條件的,-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。 |
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。 |
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。 |
2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。 |
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參。 照此實行。 |
4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。 |
5.培養細胞:檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 |
6.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 |
7.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融. |
8.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 |
大鼠血管緊張素轉化酶 (ACE)ELISA試劑盒 |
操作步驟 |
1. 加樣:標準品設定5個濃度點10個孔,每個濃度設定平行孔,加入50微升不同濃度的標準品,空白孔設定1個孔加入50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔,在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 |
2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 |
3. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。 |
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。 |
5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 |
6. 溫育:操作同3。 |
7. 洗滌:操作同5。 |
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. |
9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 |
10. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 |
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注意事項: |
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。 |
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。 |
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 |
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。 |
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 |
6. 底物請避光保存。 |
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. |
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 |
9. 本試劑不同批號組分不得混用。 |
11. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。 |
計算: |
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD |
值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標 |
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋 |
倍數,即為樣品的實際濃度。 |
試劑盒性能: |
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。 |
2.批內與批間應分別小于9%和11% |
保存條件及有效期: |
1.試劑盒保存:2-8℃ |
2.有效期:6個月 |
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